產(chǎn)品展示
pierce-89818生物素3´末端DNA標記試劑盒的詳細資料：
生物素3´末端DNA標記試劑盒
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
貨號：pierce-89818
規(guī)格：足夠用于20個標記反應
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
貨號：pierce-89818
規(guī)格：足夠用于20個標記反應
Thermo Scientific生物素 3´ 末端 DNA標記試劑盒使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）催化非模板導向的核苷酸結(jié)合到DNA3’-OH末端1,2。TdT更傾向于選擇單鏈DNA作為底物，但它也可以標記3’粘性末端和平末端的雙鏈DNA，盡管效率較低。生物素 3´ 末端 DNA標記試劑盒可將1-3個生物素標記的核糖核苷酸（生物素-11-UTP）結(jié)合到DNA鏈3’末端。這種標記方法可以將生物素定位到探針的3’末端從而減少了雜交或序列特異性蛋白結(jié)合的干擾。生物素標記的DNA探針可應用于多種非同位素檢測應用，包括電泳遷移率實驗（EMSA）、DNA和RNA印跡、菌落雜交或原位雜交。
產(chǎn)品特點：
• 非同位素標記可以消除放射物的危險性及放射性廢物的處理問題
• DNA3’末端1-3個生物素標記的核糖核苷酸可以減少雜交或序列特異性蛋白結(jié)合造成的干擾
• 生物素標記的探針可至少穩(wěn)定存放一年
• 快速有效的30分鐘標記程序
使用測序膠分析標記效率。10個不同的寡核苷酸片段（長度為21-25nt）使用生物素 3´ 末端 DNA標記試劑盒進行標記。TdT反應產(chǎn)物通過T4多核苷酸激酶（PNK）和（γ-32P）ATP進行放射性標記。PNK反應產(chǎn)物在20%丙烯酰胺/8M尿素/TBE中進行電泳。起始寡核苷酸的位置（沒有生物素）標記為“n”。通過TdT可介導每條DNA鏈參入一至兩個生物素標記的核糖核苷酸（位置分別為“n+1”和“n+2”）。標記效率從72%（ENBA正義鏈）至94%（Oct-1正義鏈）。試劑盒對照寡核苷酸的標記效率為88%-94%。
使用3’末端生物素標記雙鏈的EMSA結(jié)果。正義鏈和反義鏈通過生物素3’末標DNA記試劑盒進行標記后，在室溫雜交4小時，形成了含有圖示轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的雙鏈。通過Thermo Scientific LightShift Chemiluminescent EMSA Kit進行凝膠遷移實驗，每個結(jié)合反應需20飛摩爾的雙鏈DNA。轉(zhuǎn)錄因子來自于使用Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents（Product # 78833）獲得的Hela細胞的核提取物（每個反應需要2ul或6-7ug蛋白）。在NFκB體系中，核提取物來自于經(jīng)過TNF-α處理或不處理的Hela細胞。競爭反應含有200倍的非標記雙鏈，以此確定蛋白：DNA相互作用的特異性。
試劑盒組成：5xTdT反應緩沖液 1ml
末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT） 50ul
生物素-11-UTP 100ul
非標記的對照寡核苷酸 140ul
生物素標記的對照寡核苷酸 40ul
末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT） 50ul
生物素-11-UTP 100ul
非標記的對照寡核苷酸 140ul
生物素標記的對照寡核苷酸 40ul
生物素3´末端DNA標記試劑盒
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