產(chǎn)品展示
pierce-89818生物素3´末端DNA標(biāo)記試劑盒的詳細(xì)資料：
生物素3´末端DNA標(biāo)記試劑盒
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
貨號(hào)：pierce-89818
規(guī)格：足夠用于20個(gè)標(biāo)記反應(yīng)
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
貨號(hào)：pierce-89818
規(guī)格：足夠用于20個(gè)標(biāo)記反應(yīng)
Thermo Scientific生物素 3´ 末端 DNA標(biāo)記試劑盒使用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）催化非模板導(dǎo)向的核苷酸結(jié)合到DNA3’-OH末端1,2。TdT更傾向于選擇單鏈DNA作為底物，但它也可以標(biāo)記3’粘性末端和平末端的雙鏈DNA，盡管效率較低。生物素 3´ 末端 DNA標(biāo)記試劑盒可將1-3個(gè)生物素標(biāo)記的核糖核苷酸（生物素-11-UTP）結(jié)合到DNA鏈3’末端。這種標(biāo)記方法可以將生物素定位到探針的3’末端從而減少了雜交或序列特異性蛋白結(jié)合的干擾。生物素標(biāo)記的DNA探針可應(yīng)用于多種非同位素檢測(cè)應(yīng)用，包括電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）、DNA和RNA印跡、菌落雜交或原位雜交。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
• 非同位素標(biāo)記可以消除放射物的危險(xiǎn)性及放射性廢物的處理問題
• DNA3’末端1-3個(gè)生物素標(biāo)記的核糖核苷酸可以減少雜交或序列特異性蛋白結(jié)合造成的干擾
• 生物素標(biāo)記的探針可至少穩(wěn)定存放一年
• 快速有效的30分鐘標(biāo)記程序
使用測(cè)序膠分析標(biāo)記效率。10個(gè)不同的寡核苷酸片段（長(zhǎng)度為21-25nt）使用生物素 3´ 末端 DNA標(biāo)記試劑盒進(jìn)行標(biāo)記。TdT反應(yīng)產(chǎn)物通過T4多核苷酸激酶（PNK）和（γ-32P）ATP進(jìn)行放射性標(biāo)記。PNK反應(yīng)產(chǎn)物在20%丙烯酰胺/8M尿素/TBE中進(jìn)行電泳。起始寡核苷酸的位置（沒有生物素）標(biāo)記為“n”。通過TdT可介導(dǎo)每條DNA鏈參入一至兩個(gè)生物素標(biāo)記的核糖核苷酸（位置分別為“n+1”和“n+2”）。標(biāo)記效率從72%（ENBA正義鏈）至94%（Oct-1正義鏈）。試劑盒對(duì)照寡核苷酸的標(biāo)記效率為88%-94%。
使用3’末端生物素標(biāo)記雙鏈的EMSA結(jié)果。正義鏈和反義鏈通過生物素3’末標(biāo)DNA記試劑盒進(jìn)行標(biāo)記后，在室溫雜交4小時(shí)，形成了含有圖示轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的雙鏈。通過Thermo Scientific LightShift Chemiluminescent EMSA Kit進(jìn)行凝膠遷移實(shí)驗(yàn)，每個(gè)結(jié)合反應(yīng)需20飛摩爾的雙鏈DNA。轉(zhuǎn)錄因子來自于使用Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents（Product # 78833）獲得的Hela細(xì)胞的核提取物（每個(gè)反應(yīng)需要2ul或6-7ug蛋白）。在NFκB體系中，核提取物來自于經(jīng)過TNF-α處理或不處理的Hela細(xì)胞。競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)含有200倍的非標(biāo)記雙鏈，以此確定蛋白：DNA相互作用的特異性。
試劑盒組成：5xTdT反應(yīng)緩沖液 1ml
末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT） 50ul
生物素-11-UTP 100ul
非標(biāo)記的對(duì)照寡核苷酸 140ul
生物素標(biāo)記的對(duì)照寡核苷酸 40ul
末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT） 50ul
生物素-11-UTP 100ul
非標(biāo)記的對(duì)照寡核苷酸 140ul
生物素標(biāo)記的對(duì)照寡核苷酸 40ul
生物素3´末端DNA標(biāo)記試劑盒
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