1、轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的處理（以24孔板培養(yǎng)為例）：
貼壁細(xì)胞：在轉(zhuǎn)染前一天，在24孔板內(nèi)鋪上0.5×105細(xì)胞，500ul無抗生素培養(yǎng)基培養(yǎng)一天，到轉(zhuǎn)染時(shí)使細(xì)胞達(dá)到80％～90％的匯合率。
懸浮細(xì)胞:在制備混合物前，將4—8×105細(xì)胞用無抗生素培養(yǎng)基培養(yǎng)鋪鋪于24孔板內(nèi)。
2、轉(zhuǎn)染方法（以質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染為例）
2.1、將DNA質(zhì)粒溶于50ul無血清的Opti－MEM Ⅰ Reduced Serum Medium中?；旌暇鶆颉?/span>
2.2、將適量Lipofectamine 2000溶于50ul無血清的Opti－MEM Ⅰ中，混合均勻。在室溫下孵育5分鐘（在25分鐘內(nèi)進(jìn)行步驟c）。
2.3、孵育5分鐘后，將上述兩種混合物混合（總體積100ul）。輕輕混合均勻在室溫下孵育25分鐘（可能出現(xiàn)霧狀沉淀）。復(fù)合無在室溫下六小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2.4、在24孔板中每孔加入100ul的復(fù)合物以及適量培養(yǎng)基。十字法混合均勻。
2.5、細(xì)胞在37。C CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18－48個小時(shí)后，測量轉(zhuǎn)染效率。在加完復(fù)合物4－6小時(shí)候可更換培養(yǎng)基。
3、轉(zhuǎn)染注意事項(xiàng)
3.1、轉(zhuǎn)染嚴(yán)格來說，每種細(xì)胞的條件是不一樣的，如果實(shí)驗(yàn)時(shí)，不能確定*轉(zhuǎn)染條件，請?jiān)诩?xì)胞實(shí)驗(yàn)組共享文件夾查找類似細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法；
3.2、轉(zhuǎn)染結(jié)果的好壞，與DNA質(zhì)量密切相關(guān)，務(wù)必在實(shí)驗(yàn)之前對去內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA的質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格鑒定，至少采用以下兩種方法：瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度檢測，如果有條件，可對質(zhì)粒DNA去內(nèi)毒素質(zhì)量的進(jìn)行檢測。