鼠抗種型/類,亞類和鼠抗的分型
與人類一樣,小鼠來源的抗體也有5種同種型抗體,分別為IgA, IgD, IgE, IgG, 和 IgM。每種同種型抗體都擁有不同的重鏈。種型亦被稱為類,又因抗體亦被稱為免疫球蛋白(immunoglobulin),所以Ig的后綴字母代表抗體的類或亞類。
鼠抗的類型(isotype),亞類(subclasses)和基因名稱
每一條重鏈均有可變區(qū)和穩(wěn)定區(qū)組成。雖然穩(wěn)定區(qū)僅是免疫球蛋白重鏈的一部分,但是它已被命名為各種特異的基因。表1列出了鼠抗的類,亞類和基因名稱,并鏈接到了NCBI 和 IMGT基因數據庫。
類型 | 亞類 | NCBI基因 | IMGT基因 |
IgA |
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| |
IgD |
| ||
IgE |
|
| |
IgG | IgG1 | ||
IgG2a | |||
IgG2b | |||
IgG2c | |||
IgG3 |
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IgM |
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表1:鼠抗的類,亞類和基因名稱。
IgG2a 和 IgG2c 種型抗體:
具有等位基因Igh1-b的近交品系小鼠具有IgG2c種型抗體而不是IgG2a [1]。除其他種型抗體以外,鼠科動物的抗體重鏈只具有IgG2a 和 IgG2c二者之一。
來邦網抗體數據庫-鼠抗種型
來邦網抗體數據庫總結列舉了來自100多家高質量抗體生產商的抗體產品。其中大多數商家生產提供鼠源的單克隆抗體。下面簡單列舉了不同種型的抗體。
IgA: CD19, CD36, Sm proteins
IgE: 卵清蛋白(ovalbumin), 二硝基苯酚(dinitrophenol), CD3
IgG1: c-Jun , IGF-II受體(IGF-II receptor), Toll樣受體4(Toll樣受體4/MD-2),
IgG2a: CD45.2, 弓形蟲(Toxoplasma gondii), UBE2Q2
IgG2b: FAM3B, MARCH3, SMN2
IgG2c: CD209a
IgG3: 鈣粘蛋白(cadherin), HSPA1A, 皮質醇(cortisol)
IgM: CD15, Piwi-like protein 2, defencin
人類,小鼠,大鼠,兔,和其他動物有不同的抗體同種型和亞類的基因組。
小鼠: IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, IgG3, IgM. 見上。
大鼠: IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, IgM for Norway rat
人類: IgA1, IgA1, IgD, IgE, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM
兔:IgA1, IgA2, IgA3, IgA4, IgA5, IgA6, IgA7, IgA8, IgA9, IgA10, IgA11, IgA12, IgA13, IgA14, IgE, IgG,IgM
山羊:IgA, IgE, IgG1, IgG2, IgE, IgM
雞: IgY
鼠抗種型的重要性
抗體的種型對于體內的免疫應答及其效應機制的發(fā)揮極其重要。鼠IgG抗體對于免疫球蛋白體內生物學功能的發(fā)揮也及其重要。不同種型的鼠IgG顯示出不同的抗菌性(IgG3 >> IgG2b > IgG2a >> IgG1),并且當與腦膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)外膜蛋白PorA的P1.16表位抗原發(fā)生反應時,其調理吞噬性能也不盡相同(IgG3 > IgG2b = IgG2a >> IgG1)。 多數抗體使用人員看起來不太注重抗體的類和亞類,這在蛋白免疫印跡和免疫沉淀實驗中確實無關緊要。但是在雙標記實驗和流式細胞實驗中,遇到類似的關于二抗的問題,則必須考慮其類和亞類。(見來邦網 如何選擇第二抗體)。
鼠抗的分型
利用特異的抗重鏈穩(wěn)定區(qū)抗體進行酶聯免疫吸附試驗或流式細胞實驗,并與適當的抗體種型進行對照,可以鑒定鼠抗的種型和亞類。眾多不同的商家提供了形式多樣的種型鑒定試劑盒。文獻中引用zui多的種型鑒定試劑盒之一是AbDSerotec MMT1,見: 鼠抗的分型試劑盒.
鼠抗的分子量
一個免疫球蛋白分子具有兩條重鏈和兩條輕鏈。重鏈和輕鏈之間通過鏈內和鏈間的二硫鍵連接在一起。IgA, IgD, 和 IgG的重鏈都有一個由三個免疫球蛋白結構域組成的穩(wěn)定區(qū)。例如,鼠IgA的重鏈穩(wěn)定區(qū)有344個氨基酸(ENSMUSP00000137226);鼠IgG1穩(wěn)定區(qū)有324個氨基酸 (ENSMUSP00000100216)。而其他種型的重鏈含有的免疫球蛋白結構域數目則可能有所不同,例如,分泌性膜結合抗體IgM重鏈穩(wěn)定區(qū)包含兩個免疫球蛋白結構域。(見 Uniprot P01881 and P01882). IgE 和 IgM的重鏈穩(wěn)定區(qū)均由四個免疫球蛋白結構域組成。鼠的IgM重鏈穩(wěn)定區(qū)則有475個氨基酸(ENSMUSP00000136807)。所有種型抗體的輕鏈的可變區(qū)都是由一個單獨的免疫球蛋白結構域組成的。每個免疫球蛋白結構域大約有110個氨基酸。IgD和IgG的重鏈大約包含450個氨基酸,而IgE和IgM的重鏈包含約550個氨基酸。每條輕鏈(kappa 或lambda)都包含一個穩(wěn)定的免疫球蛋白結構域和一個可變的免疫球蛋白結構域,其長度大約為211到217個氨基酸。通常IgG的分子量約為150KD。在減重的情況下,每條重鏈約為50KD,每條輕鏈約為25KD。人類的IgA2抗體,其重鏈和輕鏈之間沒有二硫鍵相互連接。IgM分子間通常會經二硫鍵連接在一起,并傾向于以五聚體或六聚體的形式存在,因此其分子量可高達970KD。因為免疫球蛋白經常被糖基化,因此其分子量也是不同的。有時,與其名義上的分子量會相差很大。
鼠抗的生產
小鼠是單克隆抗體生產的主要宿主動物,同時也是多克隆抗體生產的宿主。截止到2012年12月6日,來邦網數據庫列舉的小鼠單克隆抗體可免疫21663種基因,鼠多克隆抗體可以免疫10387種基因。(見 鼠抗)。
抗鼠源基因的抗體
小鼠也是使用普遍的研究模型,也有許多針對小鼠基因的抗體可供使用。截止到2012年12月6日。來邦網抗體數據庫列出的單克隆抗體可以免疫6367種小鼠基因,多克隆抗體可以免疫14937種小鼠基因。(見 抗鼠源基因的抗體)。 所有抗這些基因的抗體可以在來邦網進行搜索比對,例如: 鼠p53, 鼠白蛋白, 鼠cd31, 鼠cd20, 和 鼠c-myc.
抗小鼠抗體的二抗
多數單克隆抗體均生產于小鼠體內,因此抗鼠二抗使用zui為頻繁。 來邦網對二抗的調查顯示山羊抗鼠二抗是較為普遍的選擇。在本網頁右側欄,可見抗鼠不同種型和輕鏈的二抗的信息鏈接。
參考文獻
Martin R, Brady J, Lew A. The need for IgG2c specific antiserum when isotyping antibodies from C57BL/6 and NOD mice. J Immunol Methods. 1998;212:187-92 PMID 9672206
Michaelsen T, Kolberg J, Aase A, Herstad T, Høiby E. The four mouse IgG isotypes differ extensively in bactericidal and opsonophagocytic activity when reacting with the P1.16 epitope on the outer membrane PorA protein of Neisseria meningitidis. Scand J Immunol. 2004;59:34-9 PMID 14723619
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