抗體由于性質(zhì)和所使用的儲存條件不同,其存儲的“保質(zhì)期”可能從幾周到幾年不等。每個抗體存儲的*條件是*的,然而我們還是可能總結(jié)抗體存儲的一些建議和一般準(zhǔn)則??贵w的儲存時間取決于抗體固有的性質(zhì)和儲存條件??贵w(尤其是酶)必須存放在適當(dāng)?shù)臏囟群蚿H值范圍,為了維持蛋白質(zhì)的活性,以及防止其聚集,經(jīng)常保存在一定濃度的甘油,蔗糖,或類似的物質(zhì)里面。表1 總結(jié)了抗體儲存的一般準(zhǔn)則以及其他的注意事項。
水, 4C | 25-50%的甘油或乙二醇,-20C | 凍結(jié)在-20 - 80C或在液氮 | 凍干 | |
典型的保質(zhì)期 | 1個月 | 1年內(nèi) | 多年 | 多年 |
抗體濃度 | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml |
稀釋載體蛋白 | BSA | BSA | BSA | 沒有 |
消毒或抗菌的要求 | 是 | 常 | 沒有 | 沒有 |
抗氧化劑 | 2-ME, DTT | 2-ME, DTT | 沒有 | 沒有 |
熒光共軛 | 避光保存 | 避光保存 | 避光保存 | 避光保存 |
pH值 | 7.2-7.6 | 7.2-7.6 | ||
金屬螯合劑 | EDTA | EDTA |
不要用沒有霜凍的冰箱儲存需要零度以下保存的抗體。一般的家用冰箱是沒有霜凍的,而且它們可以通過反復(fù)的自動解凍來防止霜凍的形成。
帶有標(biāo)記的抗體應(yīng)該儲存在黑色瓶子里或者用錫箔紙蓋住瓶子。
一般來說,抗體存放在≤4℃的清潔,滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會由于微生物的生長導(dǎo)致抗體退化和/或失活??贵w儲存液放在4℃環(huán)境中1天或者幾周內(nèi)其活性不會受到明顯影響。另外,抗體中可以加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲存于-20℃。通常我們?yōu)榱吮苊夥磸?fù)凍融,可以分裝抗體。我還可以加入抗微生物藥物(如*或硫柳汞)以避免微生物的生長。
冰晶的形成能夠破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),因此導(dǎo)致抗體失效。甘油或乙二醇等防凍劑可以防止水分子之間氫鍵的形成,加入到溶液中可以降低其的凝點。所以,溶液的凝點取決于抗凍劑的組成和濃度。具體的見表2。
10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | 100 | |
甘油 | -2 | -5 | -10 | -16 | -22 | -34 | -38 | -19 | -2 | 17 |
乙二醇 | -4 | -7 | -15 | -23 | -34 | -48 | -51 | -45 | -29 | -12 |
Note: 乙二醇是有毒性的,使用的時候一定要注意安全。
當(dāng)儲存溫度低于抗體溶液真實的凝點的時候,抗體溶液就會凝固。但是,這個時候并不會形成冰晶,而是發(fā)生了玻璃化作用,其可以保持抗體結(jié)果完整性。
為了增加抗體的穩(wěn)定性,可以向抗體中加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲存于-20℃。通常為了避免反復(fù)凍融,可以分裝抗體。
因為普通甘油中含有微生物污染,所以使用無菌的甘油顯得尤為重要。
抗體制劑應(yīng)通過使用0.45微米的過濾器過濾和消毒的,并且其必須進行無菌處理,以防止微生物污染。
抗微生物藥物,如終濃度為0.02-0.05%(W/V)的*(NaN3)或終濃度為0.01%(W/V)的硫柳汞可以抑制微生物的生長。
*對于大多數(shù)細(xì)胞和組織是有毒的。*溶液中抗體不應(yīng)該被直接用在活細(xì)胞中,或在體內(nèi)的研究。此外,*的干擾與大多數(shù)共軛反應(yīng)。*可以通過凝膠過濾或透析清除。
蛋白酶抑制劑可以防止蛋白質(zhì)水解。由于腹水和血清制試中都含有蛋白酶,所以儲存這類抗體和制劑的時候加入蛋白酶抑制劑尤為重要。。冷藏和/或加入蛋白酶抑制劑可用于防止這種降解。
抗體濃度過低(<1毫克/毫升)更容易發(fā)生抗體的失活以及增加物理吸附造成的損失。因此,我們都要盡量的保持抗體(例如,1-5毫克/毫升)在儲存期間的濃度。通常的做法是添加“載體”蛋白質(zhì),如純化牛血清白蛋白(BSA)以防止這種降解和損失。
多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體被純化后,儲存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進程仍然非常緩慢。即使沒有甘油,只要你*凍融,抗體也可以存儲在-20℃幾年甚至幾十年。另一個重要的事情是,該抗體濃度應(yīng)高于1毫克/毫升,因為稀的抗體容易失去活性而且容易造成物理吸附導(dǎo)致的損失。
單克隆抗體可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃保存。多年未見有失活、細(xì)菌滋生以及氧化。而凍干法(冷凍干燥,干燥或從冰凍狀態(tài))為一些冰凍以后不穩(wěn)定抗體提供了一種替代的保存方法。在大多數(shù)情況下,凍干的抗體是存放在-20℃。雖然冷凍干燥有許多優(yōu)點,它需要昂貴的設(shè)備和勞動力。
帶標(biāo)記的抗體一般儲存在黑色容器中或者用錫箔紙蓋住。
堿性磷酸酶和其他酶結(jié)合物對于冷凍特別敏感,一般應(yīng)在4C短期存儲。
標(biāo)記抗體長期保存是在終濃度為50%的甘油或乙二醇中于-20C保存。雖然某些酶結(jié)合物可在無保護劑的情況下于-20C儲存,但必須分裝,以防止反復(fù)凍融。
熒光遇光容易分解,熒光標(biāo)記的試劑(不只是抗體)必須避光保存,其應(yīng)該存放在4C、避免讓其凝固。
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